A la hora de llevar a cabo un inmunoensayo ELISA, existen determinadas dudas o cuestiones que se repiten con frecuencia al realizar nuestro experimento.

En la entrada de esta semana, os traemos un recopilatorio de preguntas frecuentes sobre kits ELISA elaborado por Biomatik, que puede ayudaros a resolver algunas dudas.

¡Empezamos!

 

Preguntas frecuentes sobre kits ELISA

1.- ¿Cómo deben almacenarse los kits ELISA?

Aunque determinados kits pueden tener unas condiciones de almacenamiento específicas que vendrán descritas en cada caso, de forma general los componentes de los kits ELISA pueden almacenarse refrigerados (4ºC) o congelados (-20ºC).

 

2.- ¿Cómo preparo los reactivos?

Los reactivos deben prepararse 10 minutos antes de su uso. Cuando se utilicen por primera vez, los reactivos deben concentrarse mediante centrifugación en el fondo del tubo.

Con frecuencia, la cantidad de reactivo en el tubo suele ser mayor a la especificada, por lo que se recomienda medir las cantidades a añadir de forma precisa con una pipeta o similar.

 

3.- ¿Cómo separo mi placa ELISA?

Las tiras de pocillos de las placas son móviles, por lo que se recomienda almacenar aquellas tiras que no vayan a utilizarse de manera inmediata entre 2-8ºC y en condiciones de oscuridad.

 

4.- ¿Cómo añado la muestra y/o los reactivos?

Todas las muestras deben añadirse durante un periodo de 5 minutos. El tiempo entre cada adición de muestra debe ser uniforme para garantizar la consistencia de la reacción.

 

5.- ¿Cómo incubo las placas?

Es preciso asegurar el uso correcto de selladores de placas nuevos y limpios para evitar la evaporación de muestras y contaminación.  Al mover la placa, debe mantenerse la mano firme para no derramar el líquido. Con el fin de mantener una temperatura constante de 37ºC, debe evitarse la apertura excesiva de la puerta de la incubadora.

 

6.- ¿Cómo lavo los pocillos?

Debe utilizarse el mismo volumen de buffer por pocillo, idealmente con una pipeta multicanal.  En caso de utilizar un lavador de placas ELISA, es preciso asegurarse de que esté limpio y libre de contaminación. Las placas deben golpearse suavemente boca abajo sobre de filtro para secarlas correctamente.

 

7.- ¿Cómo leo mi placa de ELISA?

Con el fin de evitar errores de lectura debido a una acumulación de precipitado, la placa debe leerse a los 5 minutos de añadir la solución de parada. Es preciso asegurarse de que el lector de microplacas se haya configurado correctamente y el filtro esté correctamente calibrado.  Por otro lado, hay que evitar mezclar reactivos con diferentes números de lote.

 

8.- ¿Se puede extrapolar la curva estándar?

Los resultados fuera de la curva estándar no están respaldados. Solo aquellos resultados que se encuentren dentro de la curva estándar son reproducibles y por lo tanto precisos, de acuerdo con el kit.

 

9.- ¿Por qué debo diluir mi muestra?

Si los valores salen por encima de la curva estándar, las muestras deben diluirse para ajustarlas al rango de detección del kit.

 

10.- ¿Por qué obtengo valores bajos de sensibilidad y/o absorbancia?

Es preciso asegurarse de que la proteína diana se exprese en tu muestra. En caso de que el nivel de expresión sea bajo, se intentará aumentar la cantidad de muestra utilizada.  En algunos casos puede ser necesario recurrir a un ensayo de mayor sensibilidad.  También es importante confirmar que el control positivo que se esté empleando esté dentro del rango de detección del ensayo.

 

Para terminar esta entrada de preguntas frecuentes sobre kits ELISA, os dejamos estas entradas relacionadas que pueden resultaros de interés:

Uso de cookies

Este sitio web utiliza cookies para que usted tenga la mejor experiencia de usuario. Si continúa navegando está dando su consentimiento para la aceptación de las mencionadas cookies y la aceptación de nuestra política de cookies, pinche el enlace para mayor información.plugin cookies

ACEPTAR
Aviso de cookies

Pin It on Pinterest

Share This