¿Conoces los distintos formatos de anticuerpos purificados y sin purificar?
Aunque lo habitual al comprar un anticuerpo comercial es que este venga purificado, existen diversos formatos de anticuerpos disponibles: desde los sueros crudos hasta las inmunoglobulinas purificadas mediante diferentes métodos.
En esta entrada veremos las distintas presentaciones en las que se pueden suministrar los anticuerpos para su aplicación en posteriores inmunoensayos y las concentraciones orientativas a las que se encontrarán en cada una de ellas.
Presentaciones/Formatos de anticuerpos purificados y No purificados:
Anticuerpos NO purificados
1.- Antisuero
Es frecuente que los anticuerpos policlonales se suministren en forma de suero o antisuero, lo que equivale a la sangre del animal inmunizado de la que se han eliminado las proteínas de coagulación y los glóbulos rojos.
El antisuero es una fracción no purificada que contiene:
- Anticuerpos de interés que reconocen la proteína diana
- Otros anticuerpos no específicos de nuestra proteína
- Proteínas séricas
Los antisueros son útiles por ejemplo para titular la sangre de los animales durante el proceso de inmunización. Para su uso como reactivos en distintos inmunoensayos se recomienda someterlos siempre a algún proceso de purificación previo para eliminar el resto de proteínas y enriquecer la fracción específica de anticuerpos de interés.
La concentración de anticuerpos en el antisuero suele estar habitualmente en el rango de 1-10mg/mL.
2.- Sobrenadante de cultivo celular
Los anticuerpos monoclonales se pueden producir in vitro y obtenerlos como sobrenadante de cultivos de hibridomas.
La concentración de anticuerpos en el sobrenadante de cultivo suele estar habitualmente en el rango de 1-3mg/mL.
3.- Líquido ascítico
Los anticuerpos monoclonales también se pueden producir in vivo haciendo crecer los hibridomas en la cavidad peritoneal de ratones o ratas. El líquido producido, conocido como líquido ascítico, es rico en anticuerpos monoclonales de interés.
La concentración de anticuerpos en el líquido ascítico suele estar habitualmente en el rango de 5-10mg/mL.
Anticuerpos purificados
1.- Pre-adsorción
Los sueros policlonales pueden someterse a un proceso de pre-adsorción con otras proteínas, sueros de distintas especies, etc. con el fin de eliminar todos aquellos anticuerpos no específicos para la proteína diana, reduciendo así al mínimo la probabilidad de reactividad cruzada.
2.- IgGs precipitadas
La precipitación de anticuerpos mediante la adición de sulfato amónico es una técnica de rutina en los laboratorios de producción de anticuerpos. Se basa en la incapacidad de las proteínas de mantenerse solubles al incrementar la concentración salina de la muestra, hasta que acaban precipitando.
En el caso concreto del sulfato amónico, la alta hidrofobicidad inherente a las inmunoglobulinas hace que estas precipiten a menores concentraciones de sal que otras proteínas, permitiendo de esta manera aislar los anticuerpos del resto de la fracción proteica de la muestra.
3.- Anticuerpos purificados por proteína A/G
Esta técnica permite purificar tanto anticuerpos policlonales procedentes de antisueros como anticuerpos monoclonales presentes en líquido ascítico o sobrenadantes de cultivo.
La purificación por proteína A/G se basa en la alta afinidad de estas proteínas por el dominio Fc de los anticuerpos, eliminando así el resto de la fracción proteica presente en la muestra a purificar.
Sin embargo, esta técnica no es antígeno-específica, por lo que no elimina aquellas inmunoglobulinas no específicas que puedan dar lugar a reactividad cruzada.
4.- Anticuerpos purificados por afinidad frente al antígeno
Al igual que en el caso anterior, esta técnica también es válida para purificar tanto anticuerpos policlonales a partir de antisueros como anticuerpos monoclonales de líquido ascítico o sobrenadantes de cultivo.
Al purificar la muestra de anticuerpos utilizando el antígeno de interés, se eliminará la fracción de inmunoglobulinas no específicas, enriqueciendo la fracción antígeno-específica de interés.
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