La semana pasada os contamos brevemente el fundamento y funcionamiento de los distintos tipos de ELISA:

  • ELISA directo
  • ELISA indirecto
  • ELISA tipo sándwich
  • ELISA competitivo

Como continuación a esa entrada, hoy os traemos un recopilatorio de las principales diferencias entre tipos de ELISA.

 

Diferencias entre tipos de ELISA

 

1.- Tapizado de la placa

En el caso del ELISA directo, indirecto y competitivo, la superficie de los pocillos que componen la placa se tapiza con el antígeno, mientras que en el ELISA tipo sándwich esta se reviste con el anticuerpo de captura.

 

2.- Incubación con la muestra

El paso de incubación con la muestra problema únicamente aplica al ELISA tipo sándwich y al ELISA competitivo; este paso no tiene lugar en el resto de tipos de ELISA.

 

3.- Incubación con los anticuerpos

Todos los tipos de ELISA requieren un paso de incubación con el anticuerpo primario. Sin embargo, el ELISA indirecto, el ELISA tipo sándwich y el competitivo requieren además la incubación con el anticuerpo secundario.

 

4.- Marcaje

El anticuerpo que irá marcado con la enzima es otra de las diferencias entre tipos de ELISA: en el ELISA directo es el anticuerpo primario el que se marca con la enzima, mientras que en el ELISA indirecto se marca el anticuerpo secundario.

En el ELISA tipo sándwich pueden marcarse tanto el anticuerpo de detección como el anticuerpo secundario en caso de utilizarlo. Y en el ELISA competitivo se marcará o bien el anticuerpo primario o el secundario en función del procedimiento que se siga en cada ensayo.

 

5.- Especificidad

También a nivel de especificidad existen diferencias entre tipos de ELISA. Podría decirse que el ELISA directo es el menos específico de los cuatro, ya que al analizar muestras heterogéneas la probabilidad de uniones inespecíficas y de alto ruido de fondo es más alta.

El ELISA que ofrece una mayor especificidad es el ELISA tipo sándwich, porque al utilizar dos anticuerpos distintos dirigidos frente aun mismo antígeno, este es capturado e inmovilizado de manera más selectiva, reduciendo la probabilidad de uniones no específicas y minimizando el ruido de fondo.

 

6.- Sensibilidad

En muchas ocasiones, el ELISA directo suele resultar menos sensible ya que la conjugación del anticuerpo a la enzima puede comprometer la inmunoreactividad del mismo.

Por el contrario, el ELISA indirecto suele ofrecer generalmente una mayor sensibilidad debido a que no es el anticuerpo primerio el que va marcado con la enzima, lo que permite mantener intacta su inmunoreactividad.

 

7.- Complejidad

Por el número de pasos que implica el procedimiento en cada caso, podríamos ordenar los distintos tipos de ELISA de menor a mayor complejidad en su ejecución tal y como sigue: ELISA directo < ELISA indirecto < ELISA tipo sándwich < ELISA competitivo.

 

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