Los controles de carga para Western Blot (loading controls), son una de las aplicaciones más comunes de los anticuerpos en el ámbito de la investigación. Existen varias dianas frente a las que estos anticuerpos pueden utilizarse como controles, pero no siempre resulta sencillo saber por cuál de ellas decantarse.  Para eso te traemos esta guía, donde te mostraremos algunos de los anticuerpos que más habitualmente se utilizan como controles de carga en Western Blot.

Los controles de carga, conocidos como Loading Controls, son anticuerpos que se utilizan para asegurar:

  1. Que la carga de proteína es la misma a lo largo de todos los pocillos (el nivel de expresión del control de carga no debe variar entre las calles)
  2. Que ha habido transferencia del gel a la membrana a lo largo de todo el gel
  3. Que no se ha dado el conocido como “edge effect” (cuando se utilizan muchas calles en un mismo gel, las proteínas de las calles más externas se transfieren a la membrana muy cerca del marco, pudiendo resultar en tinciones más intensas que en el centro del gel), y en caso de que se produzca, poder tenerlo en cuenta.

¿Cómo seleccionar los controles de carga para Western Blot?

Para acertar en la elección del loading control óptimo para nuestro ensayo, es necesario buscar una proteína:

    • Áltamente conservada
    • Presente en cantidad similar independientemente del tipo de muestra
    • Con un alto nivel de expresión
    • Con un peso molecular distinto al de la proteína de interés

Teniendo esto en cuenta, a continuación te resumimos las características de los controles de carga para Western Blot más comunes:

controles-de-carga-para-western-blot

Por si te resulta de utilidad, aquí te dejamos una selección de controles de carga que pueden resultarte de utilidad.

El Western Blot es una técnica de rutina en muchos laboratorios de investigación para semi-cuantificar los niveles de expresión de proteínas bajo unas determinadas condiciones. Es fundamental contar con buenos estándares para asegurarnos de que cualquier variación en esos niveles de expresión se debe a manipulaciones experimentales y no a otros factores como una deficiente transferencia de las proteínas. Si aún tienes alguna duda para seleccionar tu control de carga adecuado, contacta con nosotros en info@abyntek.com.

Fuente imagen: prescottbiochem09.wikispaces.com (Picture from Microsoft ClipArt)

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