Con esta entrada concluimos la serie de posts donde hemos profundizado en las peculiaridades de los distintos tipos de ELISA.

Tras conocer el fundamento y procedimiento en los que se basa cada uno de ellos y ver las principales características que los diferencian, hoy nos centraremos en analizar las ventajas y desventajas de los distintos tipos de ELISA.

 

Ventajas y desventajas de los distintos tipos de ELISA

 

Con el objetivo de hacer esta entrada lo más visual y práctica posible, vamos a resumir y agrupar las principales ventajas y desventajas de los distintos tipos de ELISA en la siguiente tabla:

TIPOS DE ELISA

VENTAJAS

DESVENTAJAS

ELISA directo

1.- El protocolo es simple y rápido.

2.- No hay posibilidad de reactividad cruzada con el anticuerpo secundario.

3.- Menor probabilidad de error debido al uso de un menor número de reactivos y pasos en el procedimiento.

1.- Puede dar mayor ruido de fondo, ya que otras proteínas presentes en la muestra (además del antígeno de interés) pueden adherirse a la placa.

2.- No hay amplificación de la señal ya que no se emplean anticuerpos secundarios, lo que reduce la sensibilidad del ensayo.

3.- El anticuerpo primario debe ir marcado, lo que resta flexibilidad al ensayo, y puede legar a alterar su inmunoreactividad.

ELISA indirecto

1.- Alta sensibilidad, ya que el uso de anticuerpos secundarios posibilita la amplificación de la señal.

2.- Alta flexibilidad por el hecho de que un mismo anticuerpo secundario puede emplearse con diferentes anticuerpos primarios, lo que también se traduce en un beneficio económico.

3.- El anticuerpo primario mantiene intacta su inmunoreactividad al no ir conjugado.

1.- Protocolo más complejo que el ELISA directo, que incluye pasos de incubación adicionales con el anticuerpo secundario.

2.- El uso de anticuerpos secundarios puede dar lugar a reactividad cruzada.

ELISA sándwich

1.- Alta flexibilidad, ya que la detección se puede hacer tanto por procedimiento directo como indirecto.

2.- Alta sensibilidad y especificidad, debido al uso de dos anticuerpos frente al mismo antígeno.

1.- El antígeno debe tener un tamaño lo suficientemente grande como para permitir la unión al mismo de dos anticuerpos de manera simultánea.

2.- No siempre es fácil o posible contar con pares de anticuerpos que funcionen bien en este tipo de ensayo.

ELISA competitivo

1.- Alta flexibilidad: puede basarse en procedimiento directo, indirecto o sándwich.

2.- Alta sensibilidad, robustez y consistencia.

3.- Permite la detección de antígenos de pequeño tamaño y en bajas concentraciones.

4.- No requiere el procesamiento previo de las muestras a analizar.

1.- El protocolo es relativamente complejo.

2.- Requiere el uso de antígeno de inhibición.

 

Como conclusión tras analizar las ventajas y desventajas de los distintos tipos de ELISA, podemos determinar el uso idóneo de cada uno de ellos:

  • ELISA directo: es la técnica de elección para analizar la respuesta inmune a un determinado antígeno, por ejemplo, en los procesos de producción de anticuerpos o en procedimientos diagnósticos.
  • ELISA indirecto: ensayo de elección para determinar la concentración total de anticuerpos en una determinada muestra.
  • ELISA tipo sándwich: técnica de elección cuando se trata de analizar muestras complejas, sin necesidad de purificar el antígeno previamente.
  • ELISA competitivo: técnica idónea para detectar antígenos de pequeño tamaño o que se encuentren presentes en muy bajas concentraciones en la muestra.

 

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