Guía rápida para solucionar problemas en ELISA

Esta semana os traemos una guía rápida con consejos sencillos y concretos para solucionar problemas en ELISA de manera fácil.

No se obtiene coloración

1. El protocolo no se ha seguido correctamente
   • Comprobar que se han seguido todos los pasos y en el orden correcto
2. Problemas con el conjugado y/o el sustrato
   • Comprobar que se ha añadido el sustrato y que el conjugado utilizado es correcto
3. Interacciones con azida sódica
   • Evitar los buffers de lavado que la contengan

Baja intensidad de la señal

1. Longitud de onda incorrecta
   • Configurar la longitud de onda adecuada para medir la señal
2. Tiempo de incubación insuficiente
   • Optimizar los tiempos de incubación
3. Cantidad de anticuerpo insuficiente
   • Utilizar una mayor concentración de anticuerpo e incubarlo durante el tiempo recomendado
4. Temperatura de los reactivos demasiado baja
   • Comprobar que tanto el laboratorio como las placas y el resto de los reactivos no se encuentren a una temperatura demasiado baja
5. La proteína diana está presente a una concentración muy baja en la muestra
   • Incrementar la cantidad de muestra o utilizar reactivos de detección con mayor sensibilidad

Alto ruido de fondo

1. Sobreincubación con el sustrato
   • Reducir el tiempo de incubación
2. Concentración de anticuerpo demasiado alta
   • Reducir la concentración de anticuerpo
3. Tiempo de bloqueo insuficiente
   • Incrementar el tiempo de bloqueo o probar con soluciones de bloqueo diferentes
4. Contaminación del control negativo
   • Extremar el cuidado al pipetear para evitar la contaminación con otras muestras o reactivos del ensayo
5. Lavado insuficiente de las placas
   • Comprobar el número de lavados y el volumen de solución de lavado (al menos 400uL/pocillo)
6. Incubación con el sustrato en ausencia de oscuridad
   • Colocar la placa en oscuridad inmediatamente después de añadir el sustrato
7. Sustrato degradado
   • Comprobar que el sustrato no presenta color antes de ser añadido a la placa

Baja reproducibilidad

1. Variación en los tiempos de incubación
   • Mantener los mismos tiempos de incubación para todas las placas
2. Variación en el número de lavados
   • Aplicar el mismo número de lavados a todas las placas
3. Errores al pipetear
   • Extremar el cuidado al cargar la muestra y evitar la formación de burbujas en los pocillos
4. Variaciones en la temperatura de los reactivos
   • Asegurar que tanto los reactivos como los controles y las muestras se encuentran a la misma temperatura
5. Revestimiento desigual
   • Comprobar el procedimiento de revestimiento y utilizar placas adecuadas

Entradas relacionadas:

• Preparación de muestras para ELISA
• Cómo hacer una curva patrón para ELISA
• Diferencias entre ensayos elisa y clia
• Formatos de kits ELISA para mejorar tus ensayos
• 6 Tips para solucionar problemas en un inmunoensayo ELISA

NEWSLETTER ¡No olvides suscribirte a nuestra newsletter aquí para recibir las actualizaciones semanales de este blog de investigación y anticuerpos!