Los distintos isotipos de los anticuerpos confieren a éstos diferencias a nivel de características biológicas, estructura, especificidad frente al antígeno y distribución en el organismo. El isotipado de anticuerpos es un procedimiento de gran importancia en aplicaciones tan dispares como la evaluación de la respuesta inmune tras la vacunación o durante una infección, o el desarrollo de hibridomas para la producción de anticuerpos monoclonales.

En esta entrada os contamos más acerca de los distintos isotipos de las inmunoglobulinas, así como como de la importancia y métodos para el isotipado de anticuerpos.

Isotipos de las inmunoglobulinas

Las inmunoglobulinas se categorizan por isotipos en función de las diferencias en la secuencia de aminoácidos de la región constante (Fc) de las cadenas pesadas de los anticuerpos.

A continuación os detallamos las características de los principales isotipos de los anticuerpos:

IgG

  • Funciones: pieza clave en la respuesta inmune humoral, activa el sistema del complemento y la fagocitosis de microorganismos.
  • Distribución en el organismo: se encuentra principalmente en sangre, linfa, fluido cerebroespinal y fluido peritoneal.

IgM

  • Funciones: responsable de la aglutinación y reacciones citolíticas. Debido a su estructura pentamérica, presenta una gran avidez por los antígenos.
  • Distribución en el organismo: se encuentra principalmente en sangre y fluido linfático.

IgA

  • Funciones: actúa como anticuerpo neutralizante, previniendo la invasión de patógenos a través de las superficies epiteliales.
  • Distribución en el organismo: se encuentra principalmente en la superficie de células epiteliales.

IgE

  • Funciones: interviene en las infecciones por parásitos y en reacciones alérgicas y de hipersensibilidad.
  • Distribución en el organismo: se encuentra principalmente en los pulmones, piel y membranas mucosas.

¿Por qué es importante el isotipado de anticuerpos?

El screening de los hibridomas es uno de los pasos más importantes durante el desarrollo de los mismos para la producción de anticuerpos monoclonales, con el fin de asegurar la selección de aquellos clones que resulten más productivos y específicos. Como parte de esos screenings, se realiza el isotipado de anticuerpos que implica la determinación de la clase (IgG, IgM…) así como de la subclase (IgG1, IgG2…) del anticuerpo monoclonal.

El isotipo de los anticuerpos tiene especial importancia a la hora de determinar el método de purificación de los mismos, y su posterior uso en los inmunoensayos correspondientes. Pongamos como ejemplo que nuestro anticuerpo resulta ser una IgM:

  • Método de purificación: en este caso la purificación no podrá llevarse a cabo mediante los procedimientos más habituales que son la Proteína A o G. (Puedes ampliar la información acerca de los métodos de purificación de anticuerpos en esta entrada).
  • Uso en el inmunoensayo: si el inmunoensayo de interés fuese la inmunohistoquímica (IHC), es muy probable que este anticuerpo deba ser previamente fragmentado.

Cómo realizar el isotipado de anticuerpos

El isotipado de anticuerpos requiere el uso de anticuerpos específicos anti-inmunoglobulinas capaces de detectar las diferentes clases y subclases de los anticuerpos monoclonales presentes en la muestra.

Para llevar a cabo el isotipado de anticuerpos, pueden utilizarse anticuerpos comerciales y hacer posteriormente el montaje del ensayo en el propio laboratorio, o bien, hacer uso de kit ELISA comerciales, prediseñados y listos para su uso en el isotipado de anticuerpos.

Estos kit ELISA suelen incluir una placa recubierta con el anticuerpo específico para isotipar, que capturará y reaccionará con el anticuerpos presente en la muestra. Cada pocillo (o serie de pocillos) incluirá un anticuerpo específico para cada una de las clases/subclases de inmunoglobulinas de la especie correspondiente. Posteriormente, la adición de un anticuerpo secundario de detección nos permitirá el revelado.

Para terminar, os dejamos un enlace al Catálogo de Anticuerpos para control de isotipo que ofrecen algunas de nuestras casas representadas como BioXcell, LSbio o Genetex, así como el enlace al Catálogo de kits ELISA para isotipado.

 

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