Introducción
La recuperación de antígenos es un pasa clave en técnicas inmunológicas como la inmunohistoquímica, ya que en las muestras preparadas y tratadas para esta técnica los determinantes antigénicos o epítopos pueden quedar enmascarados. El enmascaramiento de epítopos tiene como consecuencia la no detección o baja detección de los mismos, con el consecuente resultado erróneo.
Por esto, el paso de recuperación de epítopos en inmunohistoquímica, es un paso necesario y delicado.
Métodos de Recuperación de Epítopos
Existen varios métodos para la recuperación de epítopos, pero los dos principales son la recuperación mediada por calor y la mediada por enzimas.
- Recuperación Mediada por Calor: En este método, las altas temperaturas rompen los enlaces cruzados de las proteínas que se forman durante la fijación con formalina, exponiendo así los epítopos.
- Recuperación Mediada por Enzimas: Este enfoque utiliza enzimas proteolíticas que degradan las proteínas modificadas durante la fijación e inclusión, liberando los epítopos ocultos.
Ventajas de la Recuperación de Epítopos Mediada por Calor
La recuperación de epítopos mediada por calor es un método ampliamente utilizado en la inmunohistoquímica debido a varias ventajas significativas:
- Eficacia en la Exposición de Epítopos: El calor es altamente efectivo para romper los enlaces cruzados de las proteínas inducidos por la formalina, lo que permite la exposición de una amplia variedad de epítopos. Esto es especialmente beneficioso para la detección de proteínas que han sido fuertemente modificadas durante el proceso de fijación.
- Compatibilidad con Diversos Anticuerpos: A diferencia de otros métodos de recuperación que pueden ser específicos para ciertos tipos de proteínas o anticuerpos, la recuperación por calor es un método más universal. Funciona bien con una amplia gama de anticuerpos y antígenos, lo que la convierte en una técnica versátil en la investigación biomédica.
- Reducción del Tiempo de Preparación: Los métodos de recuperación por calor, como el uso de microondas, autoclaves o baños de agua caliente, son relativamente rápidos y eficientes. Esto permite una reducción significativa en el tiempo total de preparación de las muestras en comparación con otros métodos de recuperación, como los enzimáticos, que pueden requerir más tiempo y ajustes precisos para evitar la sobre-digestión.
- Facilidad de Estandarización: La recuperación de epítopos por calor es más fácil de estandarizar y reproducir en diferentes laboratorios. Los parámetros como la temperatura, el tiempo y el tipo de solución de recuperación pueden ser controlados con precisión, asegurando resultados consistentes y comparables entre distintos experimentos y laboratorios.
- Mantenimiento de la Morfología Tisular: A pesar de las altas temperaturas utilizadas, la recuperación de epítopos por calor generalmente mantiene una buena integridad morfológica de los tejidos. Esto es esencial para asegurar que las características histológicas de las muestras no se vean alteradas, permitiendo una correcta interpretación y análisis de los resultados de la IHC.
- Compatibilidad con Tecnología Automatizada: La recuperación de epítopos por calor puede integrarse fácilmente en sistemas automatizados de tinción, lo que facilita su aplicación en entornos clínicos y de investigación de alto rendimiento. Esto no solo mejora la eficiencia del proceso, sino que también minimiza la variabilidad técnica asociada con la manipulación manual.
Recuperación de Epítopos en Función del Tipo y su Buffer Asociado
La selección del buffer adecuado es crucial para la recuperación efectiva de epítopos, ya que diferentes epítopos pueden requerir condiciones específicas para ser expuestos y reconocidos por los anticuerpos. Los buffers de recuperación de epítopos están diseñados para optimizar este proceso, facilitando la interacción entre el antígeno y el anticuerpo. En este post, te ayudamos a elegir el buffer más adecuado según el tipo de epítopo.
- Epítopos Lineales Continuos
- Características: Estos epítopos son secuencias lineales de aminoácidos que se encuentran accesibles en la estructura primaria de la proteína. Son reconocidos por anticuerpos generados contra péptidos hidrófilos o fragmentos de proteínas producidos en bacterias.
- Buffer recomendado: Recovery Buffer (pH 7.4) es ideal para la recuperación de epítopos lineales. Este buffer es adecuado para su uso con el sistema 2100 Retriever y otros sistemas HIER, y es efectivo para reducir los enlaces cruzados y las modificaciones de proteínas causadas por la formalina, facilitando la exposición de estos epítopos. Su capacidad para revertir la agregación de proteínas inducida por el calor y eliminar depósitos de iones metálicos lo convierte en una herramienta versátil y efectiva para la recuperación de una amplia gama de epítopos, incluidos aquellos que requieren condiciones específicas de pH y entorno químico, como los que normalmente necesitan un tampón Tris-EDTA.
El R-Universal Buffer no solo proporciona eficacia en la exposición de epítopos, sino que también garantiza una alta compatibilidad con diversos sistemas de recuperación de antígenos y una amplia gama de anticuerpos. Por eso, es recomendado para la mayoría de las aplicaciones de recuperación de epítopos, asegurando resultados confiables, reproducibles y de alta calidad en el análisis de proteínas y muestras de tejidos.
- Epítopos Estructurales Discontinuos
- Características: Estos epítopos requieren que la proteína esté correctamente plegada, ya que dependen de la conformación tridimensional de la proteína para ser reconocidos. A menudo, estos epítopos son nativos y pueden estar glicosilados o en complejos con otras proteínas.
- Buffer Asociado: Buffer Universal (pH 9.0) es adecuado para recuperar una amplia gama de epítopos estructurales. Este buffer ayuda a revertir la agregación de proteínas inducida por el calor y a eliminar los depósitos de iones metálicos. Es especialmente útil para anticuerpos que requieren un tampón Tris-EDTA para la recuperación de epítopos.
- Epítopos Ocultos («Buried»)
- Características: Estos epítopos suelen estar ocultos dentro de la estructura de la proteína y solo son accesibles cuando la proteína se despliega o se encuentra en una forma reducida. Este tipo de epítopo no es accesible en la proteína nativa debido a su localización en regiones no expuestas de la molécula.
- Buffer Asociado: T-Universal Buffer (pH 7.4) es específico para la recuperación de epítopos lineales ubicados en estructuras ocultas. Este buffer es eficaz en el procesamiento de secciones FFPE para anticuerpos que solo reconocen una forma reducida de la proteína, comúnmente utilizadas en Western Blot.
