La proteinasa K, originalmente aislada del hongo Tritirachium album, es una serina proteasa con amplia actividad de escisión. La proteinasa K recombinante se usa con frecuencia en el aislamiento y preparación de ácidos nucleicos de alto peso molecular y se caracteriza por su capacidad para inactivar tanto DNAsas como RNAsas.
En esta entrada resolvemos algunas de las preguntas más frecuentes en cuanto al uso de la Proteinasa K.
Preguntas frecuentes sobre Proteinasa K
¿Cómo disolver la Proteinasa K liofilizada?
La mayoría de Proteinasas K comercialmente disponibles se presentan en formato liofilizado, como por ejemplo la Proteinasa K CSB-AP361972TIQ .
En este caso concreto, el polvo de proteinasa K se puede disolver en una solución con Tris-HCl 20 mM, NaCl 200 mM, glicerol al 50%, pH 8,4. Tras de la disolución, se puede almacenar durante un año a 4 ℃.
¿Cuál es la temperatura de almacenamiento a largo plazo de la Proteinasa K de liofilizada?
El almacenamiento debe hacerse siempre atendiendo a las recomendaciones de cada fabricante, pero generalmente el polvo se puede almacenar durante 18 meses a 4 ℃ y durante más de 2 años a -20 ℃.
¿Afectan los ciclos de congelación y descongelación repetidos?
Como ocurre con cualquier reactivo de naturaleza proteica, no está recomendado someterla a ciclos repetidos de congelación-descongelación.
¿Cuál es la concentración de trabajo recomendada de Proteinasa K?
La concentración de trabajo óptima suele venir determinada por cada fabricante. Sí hay que tener en cuenta que esta concentración generalmente está determinada por la temperatura, el PH y si el tampón utilizado contiene SDS y urea.
¿Cuál es la temperatura óptima para la activación de la Proteinasa K?
Generalmente, su actividad aumenta con la temperatura, siendo la temperatura óptima para la actividad entre 50 y 65 ˚C. Por encima de los 65 ˚C existe riesgo de inactivación de la Proteinasa K.
¿El EDTA inactiva la Proteinasa K?
Dado que la adición de EDTA puede afectar al calcio, y el calcio está relacionado con la estabilidad de esta proteinasa , su uso podría reducir la actividad de la Proteinasa K hasta cierto punto.
NEWSLETTER ¡No olvides suscribirte a nuestra newsletter aquí para recibir las actualizaciones semanales de este blog de investigación y anticuerpos!
