La síntesis de péptidos se ha convertido en un procedimiento fundamental en el desarrollo de muchos proyectos de investigación, permitiendo el estudio de estructuras proteicas, la definición de mecanismos moleculares y la generación de antígenos para la obtención de anticuerpos específicos, entre otros.
En esta entrada os resumimos algunas claves del proceso de síntesis de péptidos.
Aplicaciones de los péptidos sintéticos
La síntesis de péptidos puede utilizarse para aplicaciones tan diversas como:
- Desarrollo de anticuerpos epítopo-específicos (tanto anticuerpos monoclonales como policlonales)
- Estudio de interacciones antígeno-anticuerpo
- Epitope mapping
- Identificación, caracterización y estudios funcionales de proteínas
- Identificación de modificaciones postraduccionales
- Estudio de interacciones enzima-sustrato
- Uso como estándares y reactivos en espectrometría de masas
- Uso como estándares en ELISA para la titulación de anticuerpos
- Estudio de efectos biológicos de un determinado péptido
- Uso en técnicas de separación por cromatografía/electroforesis
¿Cómo se realiza la síntesis de péptidos?
SÍNTESIS DE PÉPTIDOS
1.- Síntesis en solución
La síntesis en solución es el método clásico para la síntesis de péptidos. Tras cada uno de los pasos en el proceso de síntesis, es necesario aislar y purificar el péptido, lo que resulta en un incremento del tiempo de producción y una reducción del rendimiento final. Por estos motivos, en prácticamente la totalidad de los laboratorios, este método ha sido sustituido por la síntesis en fase sólida, aunque sigue resultando útil en procesos de escalado industrial.
Las estrategias de síntesis que se pueden utilizar son:
- Elongación gradual: añadiendo secuencialmente los aminoácidos, de uno en uno.
- Síntesis convergente: sintetizando distintos péptidos de pequeño tamaño por separado que después se unirán entre sí. El uso de esta técnica permite incrementar el rendimiento respecto a la elongación gradual.
2.- Síntesis en fase sólida
En este caso, aunque la reacción se lleva igualmente a cabo en solventes orgánicos, el péptido se va sintetizando anclado sobre un soporte de resina. Este anclaje permite por un lado bloquear el extremo C-terminal del primer aminoácido, y por otro, resulta un método rápido que permite separar el péptido resultante tras cada reacción durante el proceso de síntesis.
Los dos métodos más habituales en síntesis de péptidos en fase sólida son:
- T-Boc
- Requiere equipamiento específico
- Bajo coste de los reactivos
- Mayos solubilidad de los péptidos
- Problemas de agregación poco frecuentes
- Técnica potencialmente peligrosa
- Fmoc
- No requiere equipamiento específico
- Mayor coste de los reactivos
- Menor solubilidad de los péptidos
- Problemas de agregación más frecuentes
- Técnica segura
PURIFICACIÓN
Generalmente, la purificación de péptidos suele consistir en una combinación de métodos de separación fisicoquímica, atendiendo a criterios de tamaño, carga e hidrofobicidad. Estas técnicas de purificación incluyen:
- Cromatografía de exclusión por tamaño
- Cromatografía de intercambio iónico
- Cromatografía de reparto
- Cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC)
El método más utilizado para la purificación de péptidos es la cromatografía de fase reversa. Esta técnica permite separar los péptidos diana de diversas impurezas como isómeros, secuencias supresoras, productos peptídicos fruto de reacciones colaterales, etc.
La pureza tras la síntesis de péptidos se mide como el porcentaje de péptido diana respecto a las impurezas que absorben a la misma longitud de onda. En función de la aplicación en la que se vaya a utilizar el péptido sintético, será necesario alcanzar una determinada pureza:
¿Cómo deben almacenarse los péptidos sintéticos?
- Péptidos liofilizados
Para el almacenamiento a largo plazo, lo más recomendado es la liofilización de los péptidos. Los péptidos liofilizados pueden congelarse y almacenarse durante años con una degradación mínima o nula.
- Péptidos en solución
Los péptidos en solución son mucho menos estables, ya que son susceptibles de degradación bacteriana.
Los péptidos que contienen residuos de metionina, cisteína y/o triptófano, pueden oxidarse en solución, por lo que el tiempo que pueden llegar a almacenarse en estas condiciones es muy limitado. En estos casos es importante utilizar solventes libres de oxígeno.
La síntesis de péptidos se ha convertido en un procedimiento de rutina en el curso de múltiples proyectos de investigación. Puedes ampliar la información sobre el servicio de síntesis de péptidos que ofrece Abyntek aquí, y no dudes en contactar con nosotros si necesitas asesoramiento al respecto.
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