Ventajas y desventajas de los distintos tipos de ELISA

por | Jul 11, 2019 | Anticuerpos, Aplicaciones, Investigación

Ventajas y desventajas de los distintos tipos de ELISA

Con esta entrada concluimos la serie de posts donde hemos profundizado en las peculiaridades de los distintos tipos de ELISA.

Tras conocer el fundamento y procedimiento en los que se basa cada uno de ellos y ver las principales características que los diferencian, hoy nos centraremos en analizar las ventajas y desventajas de los distintos tipos de ELISA.

 

Ventajas y desventajas de los distintos tipos de ELISA

 

Con el objetivo de hacer esta entrada lo más visual y práctica posible, vamos a resumir y agrupar las principales ventajas y desventajas de los distintos tipos de ELISA en la siguiente tabla:

TIPOS DE ELISA

VENTAJAS

DESVENTAJAS

ELISA directo

1.- El protocolo es simple y rápido.

2.- No hay posibilidad de reactividad cruzada con el anticuerpo secundario.

3.- Menor probabilidad de error debido al uso de un menor número de reactivos y pasos en el procedimiento.

1.- Puede dar mayor ruido de fondo, ya que otras proteínas presentes en la muestra (además del antígeno de interés) pueden adherirse a la placa.

2.- No hay amplificación de la señal ya que no se emplean anticuerpos secundarios, lo que reduce la sensibilidad del ensayo.

3.- El anticuerpo primario debe ir marcado, lo que resta flexibilidad al ensayo, y puede legar a alterar su inmunoreactividad.

ELISA indirecto

1.- Alta sensibilidad, ya que el uso de anticuerpos secundarios posibilita la amplificación de la señal.

2.- Alta flexibilidad por el hecho de que un mismo anticuerpo secundario puede emplearse con diferentes anticuerpos primarios, lo que también se traduce en un beneficio económico.

3.- El anticuerpo primario mantiene intacta su inmunoreactividad al no ir conjugado.

1.- Protocolo más complejo que el ELISA directo, que incluye pasos de incubación adicionales con el anticuerpo secundario.

2.- El uso de anticuerpos secundarios puede dar lugar a reactividad cruzada.

ELISA sándwich

1.- Alta flexibilidad, ya que la detección se puede hacer tanto por procedimiento directo como indirecto.

2.- Alta sensibilidad y especificidad, debido al uso de dos anticuerpos frente al mismo antígeno.

1.- El antígeno debe tener un tamaño lo suficientemente grande como para permitir la unión al mismo de dos anticuerpos de manera simultánea.

2.- No siempre es fácil o posible contar con pares de anticuerpos que funcionen bien en este tipo de ensayo.

ELISA competitivo

1.- Alta flexibilidad: puede basarse en procedimiento directo, indirecto o sándwich.

2.- Alta sensibilidad, robustez y consistencia.

3.- Permite la detección de antígenos de pequeño tamaño y en bajas concentraciones.

4.- No requiere el procesamiento previo de las muestras a analizar.

1.- El protocolo es relativamente complejo.

2.- Requiere el uso de antígeno de inhibición.

 

Como conclusión tras analizar las ventajas y desventajas de los distintos tipos de ELISA, podemos determinar el uso idóneo de cada uno de ellos:

  • ELISA directo: es la técnica de elección para analizar la respuesta inmune a un determinado antígeno, por ejemplo, en los procesos de producción de anticuerpos o en procedimientos diagnósticos.
  • ELISA indirecto: ensayo de elección para determinar la concentración total de anticuerpos en una determinada muestra.
  • ELISA tipo sándwich: técnica de elección cuando se trata de analizar muestras complejas, sin necesidad de purificar el antígeno previamente.
  • ELISA competitivo: técnica idónea para detectar antígenos de pequeño tamaño o que se encuentren presentes en muy bajas concentraciones en la muestra.

 

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