Los anticuerpos clásicamente se obtienen estimulando el sistema inmune de un animal utilizando como inmunógeno proteínas o péptidos.
La capacidad para generar esta respuesta inmune, o inmunogenicidad, depende tanto de las propias características del inmunógeno, como del protocolo de inmunización o de la especie animal utilizada para ello.
Dentro de la obtención clásica de anticuerpos, los protocolos y especificaciones son diferentes para los anticuerpos monoclonales y los policlonales.
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Anticuerpos policlonales clásicos
La producción de anticuerpos policlonales es un proceso in vivo que normalmente lleva alrededor de 90 días. Durante este periodo se inmuniza al animal con una dosis inicial y varias de recuerdo o boosters. Al finalizar, se procede a la extracción y purificación de los diferentes anticuerpos que el animal habrá generado frente al antígeno utilizado.
Anticuerpos policlonales exprés
Sin embargo, existen maneras in vivo de obtener anticuerpos policlonales de buena calidad en menor tiempo.
Los protocolos exprés permiten la obtención de anticuerpos policlonales en tan solo 45 días. Dichos protocolos exprés, se basan en lo siguiente:
Un buen estudio del antígeno
En primer lugar hay que determinar cuáles son las zonas de las proteínas que mejores cualidades poseen como determinantes antigénicos. Existen diferentes algoritmos que programas informáticos tienen en cuenta a la hora de diseñar uno o varios péptidos antigénicos para dicha proteína. Algunos de los conceptos a tener en cuenta a la hora de decantarse por un protocolo exprés son:
- la longitud y composición de la secuencia.
- la zona de la proteína en la que se encuentran los determinantes antigénicos y su conformación. Cuando más expuestos estén, mayor probabilidad de ser reconocidos.
- La reactividad cruzada con otras especies.
- La hidrofobicidad.
- Si se trata de un epítopo continuo o discontinuo.
La ruta de administración (inyección intramuscular, intraperitoneal o subcutánea)
La efectividad de la respuesta inmune depende de la llegada y distribución del antígeno al tejido linfoide. En los protocolos exprés se suele jugar con diferentes vías de administración, en función del día de inyección.
La elección del adyuvante
Los adyuvantes son sustancias que, al ser administradas junto con el antígeno, aceleran, incrementan o prolongan la respuesta inmune.
El adyuvante más conocido y utilizado es FCA (Freund’s complete adjuvant) o FIA (Freund’s incomplete adjuvant). Sin embargo, en los protocolos exprés, se utilizan adyuvantes diferentes a estos.
La dosis de inmunógeno a inyectar y la buena proporción y emulsificación del mismo junto con el adyuvante
Más información sobre la producción de anticuerpos policlonales en 45 días
Anticuerpos monoclonales clásicos
La obtención de anticuerpos monoclonales es in vivo, más larga y costosa. El proceso clásico consta de varios pasos:
- Inmunización de los animales con el antígeno
- Extracción de linfocitos y fusión con células inmortales
- Subclonación y expansión de los clones fusionados
- Screening de los clones
- Producción y purificación de anticuerpos
Para llevar a cabo todos estos pasos, se requieren como mínimo 6 meses.
Anticuerpos monoclonales recombinantes
Este tipo de anticuerpos se obtiene clonando los genes de la región variable del anticuerpo en un vector, que posteriormente se introducirá en las células para su expresión y producción de los anticuerpos. No utiliza animales de experimentación, sino técnicas in vitro para su obtención.
Una de las metodologías alternativas a la producción clásica es el formato SCVF o fragmentos variables monocatenarios. Este tipo de anticuerpos se obtienen de manera más sencilla y rápida, pudiendo obtener el anticuerpo en la mitad de tiempo.
Los anticuerpos generados poseen una alta afinidad con la diana, asegurando una mayor penetrabilidad y menor inmunogenicidad en el hospedador.
Además, este tipo de anticuerpos son ideales para la realización de inmunoarrays en los que se testan varios de anticuerpos a la vez.
Más información sobre los diferentes tipos de anticuerpos monoclonales recombinantes
Bibliografía
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