¿Por qué no sale bien mi TEST ELISA?

El test ELISA es una técnica muy sensible, ya que se basa en la especificidad antígeno-anticuerpo para determinar la presencia y cantidad de un metabolito o anticuerpos. Al ser una técnica muy sensible, pequeñas variaciones pueden llevarnos a resultados erróneos. Por este motivo, una pregunta muy común es: ¿por qué no sale bien mi test ELISA?

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Los principales problemas al realizar un test ELISA se pueden clasificar en 3 grupos: errores en las muestras, en los reactivos y en la ejecución.

ERRORES EN LAS Muestras

• No tomar y/o almacenar las muestras correctamente.
• Confundir suero y plasma.
• No homogenizar correctamente las muestras por utilizar una metodología no adecuada ni específica para el tipo de muestra.
• Presencia de sustancias endógenas en la muestra o restos de otras sustancias.

errores EN LOS Reactivos

• No seguir las instrucciones del kit ELISA a la hora de conservar y/o almacenar los reactivos.
• Contaminación de los reactivos por un mal etiquetado o uso.
• Preparar los reactivos en el momento del ensayo.

Curva patrón

• Errores al homogenizar y reconstituir el estándar para hacer la recta patrón.
• Diluciones del patrón no seriadas por incorrecto pipeteo.
• Hacer pocas diluciones del patrón dará lugar a una curva pobre en la que será difícil extrapolar los resultados.

errores en la Ejecución

• La habilidad de pipeteo es imprescindible a la hora de realizar un test ELISA.
• Utilizar pipetas mal calibradas o no respetar el rango de pipeteo de cada una.
• No reutilizar material fungible. Se puede contaminar el ensayo.
• No tratar todas las muestras por igual. Las pipetas multicanal o multidispensadoras ahorran tiempo si se utilizan de manera correcta y precisa; Si no, se puede dar el caso de no administrar la misma cantidad de reactivos en cada pocillo.
• No eliminar correctamente las solucionesde cada pocillo, de manera homogénea.
• No realizar el bloqueo durante el tiempo necesario.
• No incubar anticuerpos el tiempo necesario.
• Preparar la solución de sustrato al momento de ser utilizada
• Incubar el sustrato a la luz puede dañar la reacción enzimática.
• Dejar pasar demasiado tiempo a la hora de revelar los resultados.

Desde ABYNTEK, somos conscientes de que los pequeños tips a la hora de realizar un test ELISA son muy importantes para solventar los problemas que puedan surgir.

No dudes en contactarnos para cualquier tipo de asesoramiento, tanto en la elección del kit ELISA más adecuado para tu investigación como para su correcta utilización.