La preparación de muestras para Inmunohistoquímica (IHC) es un paso determinante en el proceso de estos inmunoensayos; cada tejido debe ser adecuadamente recogido y preparado en función de cada estudio.
La preparación de estas muestras debe hacerse en función del método de fijación empleado, que a su vez dependerá de la técnica de detección elegida.
En esta entrada te presentamos una breve guía con las claves para la preparación de muestras para Inmunohistoquímica.
Preparación de muestras para inmunohistoquímica
Las muestras para inmunohistoquímica pueden prepararse como secciones de parafina o secciones congeladas, ¿conoces las diferencias?
La primera de ellas estaría en el paso de fijación. Mientras que en las secciones de parafina la fijación se lleva a cabo antes de que el tejido sea embebido en ella, en el caso de las secciones congeladas los tejidos no se fijan hasta después de seccionarlos.
Otra de las grandes diferencias son las condiciones de conservación de los tejidos. Mientras que las secciones de parafina pueden almacenarse a temperatura ambiente durante largos periodos de tiempo, las secciones congeladas no suelen permanecer estables durante más de un año, y deben conservarse siempre a -80ºC.
Respecto a las ventajas e inconvenientes de cada una de las técnicas, podemos destacar lo siguiente:
| VENTAJAS | INCONVENIENTES | |
|
SECCIONES DE PARAFINA |
Mantiene las características morfológicas de los tejidos |
Un excesivo tiempo de fijación podría enmascarar los epítopos |
| SECCIONES DE TEJIDO CONGELADO | Mantiene las funciones enzimáticas y antigénicas de los tejidos |
La formación de cristales podría alterar la estructura de los tejidos |
Veamos con más detalle cual sería el procedimiento de preparación de muestras para inmunohistoquímica en cada caso.
Secciones de parafina
Las secciones de tejidos embebidos en parafina suelen ser de elección cuando se pretende preservar las muestras de tejido durante largos periodos de tiempo.
- Fijación de los tejidos: Antes de embeber los tejidos en parafina líquida, estos deben someterse a un proceso de fijación mediante perfusión o inmersión con la solución fijadora seguido de la disección.
- Deshidratación de los tejidos: Este paso es imprescindible debido a que el agua es inmiscible con la parafina. Se lleva a cabo mediante la inmersión de los tejidos en concentraciones crecientes de alcohol y posterior incubación con dimetilbenceno (xileno) para eliminar cualquier resto del mismo.
- Embebido en parafina líquida: La parafina se derrite a 60ºC y tras embeber en ella los tejidos, se deja coagular de nuevo a temperatura ambiente. Una vez solidificadas, las muestras se almacenan a 4ºC.
- Corte de secciones con micrótomo: Los bloque de parafina en los que están embebidos los tejidos se cortan en secciones ultrafinas mediante un micrótomo. Estas secciones se fijan sobre portas para microscopio que pueden almacenarse a temperatura ambiente hasta su uso.
Secciones congeladas
El procesamiento de las muestras es más rápido en este caso, pero la estabilidad de las mismas es mucho menor, por lo que no pueden almacenarse durante largos periodos de tiempo.
Por otro lado, en el caso de tejidos congelados, las secciones suelen ser algo más gruesas, pudiendo dar lugar a una peor resolución al microscopio.
- Congelación instantánea: El tejido se corta en láminas de unos 3 mm de grosor y se congela mediante inmersión en nitrógeno líquido.
- Corte de secciones con un cryostat: A la hora de seccionar el tejido es importante que el cryostat esté a una temperatura entre -15ºC y -23ºC ya que las secciones podrían curvarse sobre sí mismas a temperaturas demasiado bajas, o pegarse a la cuchilla a temperaturas superiores.
- Fijación: En este caso, como ya hemos comentado anteriormente, la fijación se lleva a cabo tras la congelación y corte de las secciones. Normalmente, el solvente de elección es el alcohol, ya que el formaldheido puede dar lugar a reacciones cruzadas con los antígenos y enmascararlos.
Esperamos que esta entrada sobre preparación de muestras para inmunohistoquímica os haya resultado de interés.
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