La citometría de flujo (CMF) es una técnica basada en la utilización de luz láser, muy útil para el recuento y estudio de las células y sus características.
Para realizar correctamente una citometría de flujo y obtener los mejores resultados posibles en tu investigación, es importante tener en cuenta varios aspectos.
Uno de las claves más importantes para realizar correctamente una citometría de flujo es la preparación de la muestra. Desde Abyntek, te contamos algunos tips que tener en cuenta a la hora de preparar tu muestra:
ELEGIR LOS TUBOS DE ENSAYO CORRECTOS
Dependiendo del citómetro que tengas en tu laboratorio, necesitarás utilizar un tipo u otro de tubo de ensayo: con fondo redondo o fondo plano, formado por poliestireno o polipropileno, etc.
Esta verificación previa te permitirá no estar transfiriendo tu muestra de un tubo a otro y, por tanto, la posibilidad de perder parte de la muestra en estos traspasos, lo que podría afectar al número de células iniciales.
Además, dependiendo del tipo de plástico del que esté formado el tubo, las células se adherirán a este con mayor o menor afinidad. Por ejemplo, células como los monocitos, se adhieren con mayor fuerza a superficies como el poliestireno y con menor fuerza al polipropileno.
Por lo que, si tienes en cuenta estos aspectos de los tubos de ensayo podrás conservar mejor tu muestra.
PRESERVAR LAS CONDICIONES DE LA MUESTRA
Es importante, en este sentido, no solo conservar la muestra en las condiciones adecuadas, sino tener especial cautela en los distintos procesos que se lleven a cabo en tu experimento. Por ejemplo, en la centrifugación, en la agitación de la muestra (es conveniente evitar el uso del vortex) o en la aspiración del sobrenadante.
PREVENIR LA AGLOMERACIÓN DE LAS CÉLULAS
Para realizar correctamente una citometría de flujo, el laser debe detectar las células de manera individual, por lo que es importante intentar evitar, en la medida de lo posible, la aglomeración de las células.
Para evitar esta aglomeración, se debe prevenir la apoptosis y/o necrosis celular, utilizar tampones específicos que eviten la formación de trampas extracelulares, eliminar el ADN que liberan las células muertas mediante el uso de DNAsas o evitar la adhesión de las células dependientes de cationes utilizando EDTA.
ELIMINAR UNIONES NO ESPECÍFICAS
Para obtener buenos resultados en nuestra citometría de flujo, es esencial que no se produzcan uniones inespecíficas de los anticuerpos a las células de la muestra. Para poder evitar esta unión, se pueden utilizar soluciones de bloqueo. Otra opción es incubar la muestra con suero de la misma especie que los anticuerpos que se van a utilizar.
Eliminar este tipo de uniones es especialmente importante si el análisis que vas a hacer se enfoca en el uso de monocitos o células dendríticas, ya que este tipo de células pueden expresar un rango de receptores Fc que tienen la capacidad de unir anticuerpos a través de su región Fc, en vez de hacerlo a través de su sitio de unión específica de antígeno.
ELIMINAR LAS CÉLULAS MUERTAS
La presencia de células muertas en la muestra puede dar lugar a falsos positivos en nuestra citometría de flujo, ya que generan cierto grado de autofluorescencia.
Algunos métodos comunes para eliminarlas son el uso de FSC o SSC. También se recomienda el uso de marcadores de viabilidad que ayudan a identificar estas células muertas.
Por lo que, teniendo en cuenta estos tips para intentar mantener tu muestra en las mejores condiciones, podrás asegurarte que tu experimento tenga el mejor comienzo posible, y así poder realizar correctamente una citometría de flujo.
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