Los detergentes son reactivos necesarios en los procesos de extracción, purificación y/o solubilización de proteínas en el laboratorio. Sin embargo, estos detergentes pueden interferir en los ensayos posteriores, por lo que es importante eliminarlos de la muestra.
La facilidad de eliminación de los detergentes y la elección del método para hacerlo dependen de las características de los mismos incluyendo el peso molecular y la Concentración Crítica de Micelas (CMC), que es la concentración mínima a la que los monómeros de detergente forman micelas y resulta determinante en su fuerza de unión a las proteínas.
Esta semana os traemos tres métodos para eliminar detergentes en muestras de proteínas.
Métodos para eliminar detergentes en muestras de proteínas
Filtración en gel
También conocida como cromatografía de exclusión, esta técnica separa las moléculas en función de su tamaño. Aquellas moléculas que presenten un tamaño menor al tamaño de poro de las partículas que forman el gel quedan retenidas, mientras que las moléculas de mayor tamaño no entran es estos poros y eluyen rápidamente.
De esta forma, se consigue separar las moléculas de detergente junto con la urea, sales y otras pequeñas moléculas del resto de moléculas de mayor tamaño presentes en la muestra como las proteínas.
Para conseguir una buena eliminación mediante este método, la concentración del detergente debe ser menor que la CMC.
Diálisis
La diálisis se emplea para eliminar detergentes en muestras de proteínas mediante difusión pasiva.
Esta técnica se rige por el mismo principio que la filtración en gel, separa las moléculas en función de su tamaño. La diferencia es que en este caso la membrana retiene las moléculas de mayor tamaño en la matriz, y eluye las de menor tamaño y, además, el tiempo de separación de las moléculas es mayor.
Al igual que en la técnica anterior, la concentración del detergente debe ser menor que la CMC.
Cromatografía de intercambio iónico
En el caso de que el detergente sea no iónico o de ion hibrido, realizar una cromatografía de intercambio de iones para eliminar detergentes en muestras de proteínas es la mejor opción.
En esta técnica, las moléculas de proteína se adsorben en base a su carga neta a la superficie de una resina cargada positiva o negativamente mientras que las micelas de detergente pueden pasar al no quedar retenidas. Las moléculas de proteína se eluyen posteriormente con un tampón sin detergente.
Entradas relacionadas:
- Cómo optimizar la solubilidad de las proteínas
- 5 métodos para cuantificar proteínas
- Cómo almacenar las proteínas para evitar su degradación
- 7 tips para transferir proteínas de gran tamaño en Western Blot
NEWSLETTER ¡No olvides suscribirte a nuestra newsletter aquí para recibir las actualizaciones semanales de este blog de investigación y anticuerpos!
