Los anticuerpos son reactivos de alta especificidad y sensibilidad que los convierte en herramientas de gran utilidad en muchas aplicaciones de investigación. Aunque la aplicación más conocida sigue siendo la detección y cuantificación de proteínas, los anticuerpos se emplean para otras muchas aplicaciones en investigación biomédica.
En esta entrada repasamos las aplicaciones de los anticuerpos en investigación biomédica mediante el uso de las principales técnicas.
Aplicaciones de los anticuerpos en investigación biomédica
ELISA
El inmunoensayo ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) se lleva a cabo añadiendo la muestra de interés a placas de 96 pocillos donde los anticuerpos capturarán y detectarán la presencia de la proteína de interés.
Las principales aplicaciones de los anticuerpos en la técnica ELISA son:
- Detectar la presencia de una proteína específica en una muestra heterogénea
- Cuantificar la cantidad de proteína presente en dicha muestra comparando la absorbancia de la muestra problema con la curva estándar generada a partir de diluciones seriadas de una concentración conocida de la proteína diana
Western Blot
La técnica de Western Blot permite separar proteínas a partir de muestras complejas en función de su peso molecular y posteriormente, utilizando anticuerpo marcados, detectarlas mediante quimioluminiscencia o fluorescencia.
Las principales aplicaciones de los anticuerpos en la técnica de Western Blot son:
- Detectar la presencia de la proteína diana en una muestra concreta
- Cuantificar dicha proteína mediante la carga en gel de los controles correspondientes que permitan la normalización de su concentración
- Comparar los niveles de expresión relativos entre distintos tipos celulares o entre distintas condiciones de tratamiento.
Inmunoprecipitación
Este método utiliza anticuerpos conjugados a beads magnéticas o de agarosa que, una vez unidos a la proteína de interés, hacen que el complejo anticuerpo-proteína precipite mediante centrifugación u otro método mecánico. Tras lavar la proteína no unida, la adición de un buffer de bajo pH provoca la disociación del complejo, permitiendo la purificación de la proteína diana.
Las principales aplicaciones de los anticuerpos en la técnica de Inmunoprecipitación de son:
- Extraer una proteína de interés a partir de una muestra compleja para posteriores experimentos como:
- Cuantificación mediante Western Blot o ELISA
- Estudios de interacción entre proteínas
Inmunohistoquímica / Inmunocitoquímica
En estas técnicas los anticuerpos se utilizan para visualizar la presencia de una proteína específica en una célula o un tejido:
Las principales aplicaciones de los anticuerpos en estas técnicas son:
- Detectar la presencia de la proteína diana y su localización dentro de la célula (Inmunocitoquímica)
- Detectar la presencia de la proteína diana y su localización en un tejido (Inmunohistoquímica)
Citometría de Flujo
Esta técnica permite la detección de proteínas expresadas en la superficie de una célula, o bien mediante la permeabilización de la membrana, detectar proteínas de localización intracelular. La muestra se incuba con anticuerpos específicos conjugados a fluoróforos, y posteriormente se mide la señal fluorescente mediante un citómetro de flujo.
Las principales aplicaciones de los anticuerpos en la técnica de Citometría de Flujo son:
- Identificar/analizar poblaciones celulares
- Medir la cantidad relativa de una proteína expresada en la superficie o en el interior de una célula
Uso In Vivo
Otra de las aplicaciones de los anticuerpos en investigación biomédica es su uso para interferir en los procesos In Vivo. Para estas aplicaciones se deben usa anticuerpos de grado In Vivo con mayor grado pureza, concentraciones ultra bajas de endotoxinas y libres de estabilizantes y conservantes. (Más información post).
Las principales aplicaciones de los anticuerpos In Vivo son:
- Inhibir la función de una proteína deteniendo su efecto en el organismo
- Activar rutas celulares mediante su unión a receptores celulares
- Agotar una población celular específica para la realización de análisis funcionales
¿Quieres que te ayudemos a encontrar el anticuerpo que necesitas? Prueba nuestro buscador aquí
Entradas relacionadas:
- 5 aplicaciones de los anticuerpos monoclonales
- Western Blot o ELISA, ¿cómo elegir?
- Ventajas y desventajas de los distintos tipos de ELISA
- Diferencias entre Inmunohistoquímica e Inmunocitoquímica
- Anticuerpos en bulk para ensayos in vivo: preguntas frecuentes
NEWSLETTER ¡No olvides suscribirte a nuestra newsletter aquí para recibir las actualizaciones semanales de este blog de investigación y anticuerpos!
