La saliva es un tipo de muestra frecuentemente utilizada para la realización de análisis genéticos. En la actual situación de pandemia por el Coronavirus SARs-CoV-2, son muchos los investigadores y clínicos que se preguntan si el manejo de estas muestras puede suponer un riesgo añadido en caso de que algún paciente esté infectado.

En torno a esta discusión, DNA Genotek ha llevado recientemente a cabo un estudio que demuestra la capacidad de la solución Oragene que contienen sus kits de recolección de saliva para inactivar el virus SARS-CoV-2.

Inactivación del SARS-CoV-2 en muestras de saliva con Oragene


En el estudio llevado a cabo por DNA Genotek, el PBS o las muestras de saliva / heces (SARS-CoV-2 negativo confirmado) recogidas de sujetos sanos se inocularon con una cantidad conocida de virus infeccioso SARS-CoV-2.

Posteriormente, se agregaron alícuotas de PBS, saliva o heces a los kits de recolección de DNA Genotek donde se mezclaron con las soluciones estabilizantes Oragene. Las muestras de PBS, saliva y heces no inoculadas con el Coronavirus, se utilizaron como controles negativos y el PBS inoculado (sin solución estabilizante) se utilizó como control positivo. El virus infeccioso restante en cada muestra se cuantificó en cultivo de células Vero E6 usando un ensayo de dilución de punto final y el TCID50 / mL fue calculado usando el método Reed-Muench.

Cuando se mezcló PBS o saliva / heces inoculadas con virus con cada una de las soluciones estabilizantes probadas, se observó una reducción> 99% del virus infeccioso en la muestra. Además, no hubo diferencias observables entre los controles negativos libres de virus y las muestras de prueba recolectadas en kits de recolección de muestras de DNA Genotek. (Figure 1, fuente DNA Genotek).

Inactivación del SARS-CoV-2 en muestras de saliva

Estas observaciones son respaldadas por otros estudios como el realizado recientemente en SUNY Upstate Medical University (Syracuse, NY), donde se observó la inactivación viral completa del virus Zika por la solución estabilizante en ORAcollect • RNA dentro de los 15 minutos de tratamiento de la muestra (Figure 2, fuente DNA Genotek).

Inactivación del SARS-CoV-2 en muestras de saliva

Además de los estudios en los que se prueba directamente la capacidad de los productos de DNA Genotek para la inactivación del SARS-CoV-2 en muestras de saliva, existe literatura relevante que indica que ciertos componentes encontrados en las soluciones estabilizadoras Oragene pueden inactivar completamente los virus con envoltura, incluido el SARS-CoV (el virus que causa el Síndrome Respiratorio Agudo Severo) o MERS-CoV (causa el Síndrome Respiratorio del Medio Oriente), los cuales tienen similitud con el SARS-CoV-2 1,2. Los métodos para inactivar los virus con envoltura de este tipo se han estudiado ampliamente y se ha demostrado que la envoltura lipídica (capa externa) de estos virus es muy susceptible al tratamiento con detergentes y solventes suaves 3,4. Las químicas estabilizadoras contenidas en los productos de las familias de productos Oragene, ORAcollect y OMNIgene de DNA Genotek contienen un detergente iónico que se espera que haga que los virus envueltos no sean infecciosos 5,6.

SARS-CoV y MERS-CoV también son sensibles al tratamiento térmico. Varios estudios han demostrado que el tratamiento térmico del Coronavirus a temperaturas que oscilan entre 56 ° C y 68 ° C durante un período de tiempo que varía de 10 a 60 minutos es eficaz para inactivar las partículas del virus 4,7,8 y que el tiempo requerido para obtener una completa inactivación viral disminuye con el aumento de la temperatura 9.

Aunque los datos presentados anteriormente indican que las soluciones estabilizadoras de DNA Genotek conducen a la inactivación del SARS-CoV-2 en muestras de saliva sin requerir pasos de inactivación adicionales, en el caso de que se recolecten muestras de individuos sospechosos de estar infectados o se obtengan de áreas consideradas de alto riesgo, y si el investigador considera que se deben tomar precauciones adicionales, las muestras pueden incubarse en sus viales originales a temperaturas elevadas como se indica en las publicaciones mencionadas anteriormente. Es responsabilidad de los investigadores y clínicos determinar si se requiere esta precaución adicional, de acuerdo con las circunstancias locales y las regulaciones aplicables.

Referencias:

  1. Coronaviridae Study Group of the International Committee on Taxonomy of Viruses. The Species Severe Acute Respiratory Syndrome-Related Coronavirus: Classifying 2019-nCoV and Naming It SARS-CoV-2. Nat Microbiol. Mar 2 2020 (https://doi.org/10.1038/s41564-020-0695-z).
  2. Lai C et al. Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) and coronavirus disease-2019 (COVID-19): The epidemic and the challenges. Int J Microb Agents. Feb 20 2020 (https://doi.org/10.1016/j.ijantimicag.2020.105924).
  3. Rabenau HF et al. SARS-coronavirus (SARS-CoV) and the safety of a solvent/detergent (S/D) treated immunoglobulin preparation. Biologicals. 33(2):95-99 (2005).
  4. Darnell MER et al. Evaluation of Inactivation Methods for Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus in Noncellular Blood Products. Transfusion. 46(10), 1770-7 (2006).
  5. Howett, MK et al. A Broad-Spectrum Microbicide with Vircucidal Activity against Sexually-Transmitted Viruses. Antimicrob Agents Chem. 43(2):314-321 (1999).
  6. Piret, J et al. Sodium Lauryl Sulfate, a Microbicide Effective Against Enveloped and Nonenveloped Viruses. Curr Drug Targets. 3(1):17-30 (2002).
  7. Rabenau HF et al. Stability and inactivation of SARS coronavirus. Med Microbiol Immunol. 194:1-6 (2005).
  8. Kariwa H et al. Inactivation of SARS coronavirus by means of povidone-iodine, physical conditions, and chemical reagents. Jpn J Vet Res. 52(3):105-112 (2004).
  9. Paget A et al. Evaluation of SARS-Coronavirus Decontamination Procedures. Applied Biosafety. 12(2):100-8 (2007).

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